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　　Elisa實(shí)驗(yàn)：ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線制作流程

　　一、數(shù)據(jù)準(zhǔn)備

　　輸入濃度與OD值?

　　在Excel表格中錄入標(biāo)準(zhǔn)品的濃度(X軸)和對(duì)應(yīng)的OD值(Y軸)，雙抗體夾心法需計(jì)算OD值減去空白對(duì)照(OD-blank)?。

　　數(shù)據(jù)預(yù)處理?

　　競(jìng)爭(zhēng)法建議使用Logit-log或四參數(shù)擬合，雙抗夾心法可選直線、二次曲線或四參數(shù)擬合?。

　　二、曲線擬合

　　選擇擬合模型?

　　常用模型：直線回歸(R2≥0.99)、四參數(shù)Logistic(適用于寬濃度范圍)、二次曲線(OD值>2.0時(shí)更優(yōu))?。

　　通過軟件(如Curve Expert 1.3或ELISA Calc)自動(dòng)擬合，優(yōu)先選擇R2值天津1的方程?。

　　驗(yàn)證擬合效果?

　　檢查回歸方程系數(shù)(如四參數(shù)方程中的a、b、c、d值)及R2值，確保曲線平滑無(wú)異常點(diǎn)?。

　　三、計(jì)算樣本濃度

　　反向推算?

　　將待測(cè)樣本的OD值代入擬合方程，計(jì)算濃度值(需乘以稀釋倍數(shù)N)?。

　　二次曲線可能產(chǎn)生雙解，需舍棄偏離度大的結(jié)果?。

　　結(jié)果輸出?

　　復(fù)制擬合方程和計(jì)算數(shù)據(jù)至報(bào)告，標(biāo)注R2值及擬合方式?。

　　四、注意事項(xiàng)

　　扣本底處理?：若試劑盒要求，需先扣除空白孔OD值再擬合?。

　　重復(fù)實(shí)驗(yàn)?：標(biāo)準(zhǔn)曲線需每次實(shí)驗(yàn)獨(dú)立制作，避免批次差異影響準(zhǔn)確性?。

　　五、擴(kuò)展工具推薦

　　軟件工具?：Curve Expert 1.3(支持多項(xiàng)式擬合)?、ELISA Calc(支持多種回歸模型)?。

　　注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說(shuō)明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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