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　　ELISA試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題解析

　　1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳?

　　可能原因?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品溶解不充分或稀釋錯(cuò)誤(建議使用新鮮配置的母液)。

　　孵育時(shí)間/溫度不穩(wěn)定(需嚴(yán)格控制在37℃±1℃)。

　　洗板不jing(建議使用洗板機(jī)，確保每孔注滿洗滌液)。

　　解決方案?：

　　標(biāo)準(zhǔn)品分裝后-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

　　使用前充分震蕩混勻，梯度稀釋時(shí)更換槍頭。

　　2. 顯色異常(顏色過(guò)淺或過(guò)深)?

　　可能原因?：

　　底物溶液失效(TMB避光保存，開(kāi)封后1個(gè)月內(nèi)用完)。

　　終止液添加時(shí)間不一致(建議顯色后5分鐘內(nèi)終止)。

　　樣本濃度過(guò)高(需預(yù)實(shí)驗(yàn)確定稀釋倍數(shù))。

　　解決方案?：

　　檢查底物是否出現(xiàn)藍(lán)色沉淀(變質(zhì)標(biāo)志)。

　　使用酶標(biāo)儀讀取OD值，避免肉眼判斷誤差。

　　3. 重復(fù)性差(板內(nèi)/板間變異大)?

　　可能原因?：

　　加樣量不準(zhǔn)(建議使用校準(zhǔn)后的移液器，避免氣泡)。

　　孔間污染(加樣時(shí)槍頭勿觸碰孔壁)。

　　孵育環(huán)境不均(使用恒溫?fù)u床或水浴)。

　　解決方案?：

　　設(shè)置復(fù)孔(至少3孔/樣本)，CV值應(yīng)<15%。

　　4. 高背景值?

　　可能原因?：

　　封閉不充分(建議使用5%脫脂奶粉或BSA封閉)。

　　一抗/二抗?jié)舛冗^(guò)高(需優(yōu)化抗體稀釋比例)。

　　洗滌液殘留(洗板后拍干，避免交叉污染)。

　　解決方案?：

　　增加封閉時(shí)間(37℃ 1小時(shí)或4℃過(guò)夜)。

　　5. 樣本OD值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍?

　　可能原因?：

　　樣本基質(zhì)干擾(如高脂、溶血樣本需預(yù)處理)。

　　樣本稀釋倍數(shù)不足(建議預(yù)實(shí)驗(yàn)確定線性范圍)。

　　解決方案?：

　　使用樣本稀釋液(含1% BSA或0.1%吐溫-20)。

　　6. 酶標(biāo)儀讀數(shù)異常?

　　可能原因?：

　　濾光片選擇錯(cuò)誤(TMB檢測(cè)需450nm，OD校正570nm)。

　　孔底氣泡或污染(讀數(shù)前輕震板)。

　　解決方案?：

　　定期校準(zhǔn)酶標(biāo)儀，使用空白孔調(diào)零。

　　操作注意事項(xiàng)?

　　試劑平衡?：所有試劑使用前需室溫平衡30分鐘。

　　時(shí)間控制?：顯色反應(yīng)時(shí)間嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)(通常10-15分鐘)。

　　數(shù)據(jù)記錄?：及時(shí)記錄OD值，避免終止液揮發(fā)后讀數(shù)。

　　若問(wèn)題持續(xù)，建議聯(lián)系供應(yīng)商提供技術(shù)復(fù)核(如抗體效期驗(yàn)證或樣本檢測(cè))。

　　注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。

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