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ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果90%取決于它!樣本處理全攻略
更新時(shí)間:2025-10-24瀏覽:110次

  ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果90%取決于它!樣本處理全攻略

  ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性高度依賴樣本處理的規(guī)范性,以下是關(guān)鍵要點(diǎn)總結(jié):

  一、樣本類型與處理原則

  血清/血漿?

  血清需室溫靜置1-2小時(shí)或4℃過(guò)夜后,3000×g離心15-20分鐘,避免溶血和反復(fù)凍融?。

  血漿需使用EDTA或肝素抗凝,采集后30分鐘內(nèi)離心,避免室溫放置過(guò)久導(dǎo)致因子降解?。

  細(xì)胞培養(yǎng)上清?

  1000×g離心20分鐘去除碎片,建議分裝保存并避免凍融?。若檢測(cè)低豐度蛋白,可濃縮樣本。

  組織/細(xì)胞裂解液?

  組織需按1:9(w/v)加入含蛋白酶抑制劑的PBS勻漿,冰上超聲或凍融裂解后5000×g離心?。

  貼壁細(xì)胞需胰酶消化后PBS洗滌,超聲裂解時(shí)建議3×5秒(冰上操作)?。

  二、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

  避免假陽(yáng)性?:樣本需嚴(yán)格無(wú)菌,防止細(xì)菌污染(含內(nèi)源性HRP)或纖維蛋白原干擾?。

  防止假陰性?:目標(biāo)蛋白易降解時(shí)需添加蛋白酶抑制劑,避免使用含NaN3或高濃度EDTA的保存液?。

  標(biāo)準(zhǔn)化操作?:離心參數(shù)、凍融次數(shù)需統(tǒng)一,不同批次樣本處理?xiàng)l件需一致?。

  三、特殊樣本處理

  腦脊液/尿液?:需5000-6000×g離心去除沉淀,分裝后-80℃保存。

  酸化樣本?:部分樣本需用HCl中和后檢測(cè)(如某些細(xì)胞因子)?。

  四、常見錯(cuò)誤與優(yōu)化

  高背景?:可能因封閉不充分或洗滌不凈,建議使用5%脫脂牛奶+0.05% Tween-20封閉液?。

  重復(fù)性差?:建議預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本稀釋倍數(shù),確保OD值在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)。

  通過(guò)規(guī)范樣本處理流程,可顯著提升ELISA數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性?。

  注:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。

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