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小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)ELISA試劑盒使用說明書
發(fā)布時間:2025/10/10瀏覽:45次
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     BS-2331 小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)ELISA試劑盒

  一、實驗原理

  采用雙抗體夾心法檢測小鼠樣本中的GR蛋白濃度。將抗GR單抗包被于微孔板,加入樣本后形成抗原-抗體復(fù)合物,再與HRP標記的二抗結(jié)合,最終通過TMB底物顯色反應(yīng)定量分析。

  二、試劑盒組成

  組分規(guī)格保存條件

  預(yù)包被微孔板96T/48T2-8℃避光

  GR標準品6濃度梯度-20℃凍存

  HRP標記檢測抗體1瓶2-8℃避光

  TMB底物液A/B各1瓶2-8℃避光

  注:不同批號試劑嚴禁混用

  三、關(guān)鍵操作步驟

  樣本處理

  血清/血漿:離心后取上清,避免溶血

  組織勻漿:按1:9比例加入裂解液,冰上超聲破碎

  標準曲線制備

  凍干標準品需用200μL標準品稀釋液復(fù)溶,靜置10分鐘后上下顛倒混勻15次

  梯度稀釋時每次稀釋后需短暫離心,避免氣泡產(chǎn)生

  孵育條件

  37℃溫育90分鐘(每步加樣后輕拍板邊緣混勻)

  洗滌液需現(xiàn)配現(xiàn)用,每次浸泡時間≤30秒

  四、結(jié)果判定標準

  有效性驗證

  標準曲線R2≥0.99,最高濃度OD值在2.0-2.4之間

  復(fù)孔變異系數(shù)(CV%)應(yīng)<15%

  濃度計算

  樣本OD值在標準曲線20%-80%范圍內(nèi)時可直接計算

  超出范圍需重新稀釋

  五、常見問題解決方案

  現(xiàn)象可能原因處理措施

  全板不顯色漏加HRP酶標抗體檢查加樣順序并重做

  背景值過高洗滌不充分增加洗滌次數(shù)至5次

  標準曲線非線性標準品溶解不均復(fù)溶后延長離心時間

  注意:以上僅供參考,不作為實際數(shù)據(jù),實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。

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